细胞名称：PK136小鼠X小鼠

　　描述：杂交瘤细胞系PK136分泌一种小鼠单克隆抗体（IgG2a），此抗体与小鼠NK细胞起反应。该细胞系由SP2/0-Ag14骨髓瘤和用CE小鼠脾细胞和骨髓细胞免疫的（C3H X BALB/C）F1小鼠的脾细胞融合而成。此抗体对NK特异且在有补体时有细胞毒作用。此抗体与不同小鼠株的细胞的反应方式，与常规的NK1.1抗血清的反应方式相符。

　　动物种别：小鼠X小鼠

　　性别：

　　组织来源：B淋巴细胞；杂交瘤；

　　形态：淋巴母细胞

　　培养基和添加剂：DMEM培养基(GIBCO,货号12800017，添加NaHCO3 1.5g/L)或Hybri-Care，90%；优质胎牛血清，10%。气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37摄氏度。

　　供应限制：A。仅供研究之用。

　　REFERENCE:J.Immunol.137:3742-3747,1986.PubMed:3782794 Hybridoma 3:301-303,1984.PubMed:6500587

　　PK136小鼠X小鼠培养步骤：

　　1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6mL完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中），培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

　　2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

　　1、对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：

　　1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

　　2.加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的完全培养基终止消化。

　　3.轻轻吹打细胞，完全脱落后吸出，在1000RPM条件下离心8-10分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

　　4.按5-6ml/瓶补加培养液，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6 ml培养液的新皿中或者瓶中。

　　2、对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：

　　方法一：收集细胞，1000RPM条件下离心8-10分钟，弃上清液，补加1-2ml培养液后吹匀，将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或瓶中。

　　方法三：可选择半数换液方式，弃半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基新皿中或者瓶中。

　　1）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。弃培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，进行离心收集，1000RPM条件下离心8-10分钟，去除上清，按冻存数量加入到冻存液中。